PRÁCTICA 11: ROE

RESISTENCIA OSMÓTICA ERITROCITARIA

- FUNDAMENTO

La resistencia osmótica eritrocitaria (ROE) o fragilidad osmótica eritrocitaria (FOE) es una técnica realizada para el estudio de las membranopatias eritrocitarias. Debido a su forma biconcava, los eritrocitos pueden aceptar, sin producir hemolisis, una entrada de agua capaz de aumentar su volumen hasta el 70%.

- SIGNIFICADO CLÍNICO

Cuando existe un defecto en la forma del eritrocito que disminuye la relación S/V, como ocurre en la esferocitosis hereditaria, este limite disminuye, y la hemolisis comienza en presencia de soluciones menos hipotonicas, aumentando la ROE.

Dicha medida se expresa como aquella concentración de NaCL (en g/L) necesaria para producir el 50% de la hemólisis (H50).

- MATERIAL Y REACTIVOS

Solución madre de NaCl de 100 g/L en agua bidestilada

• Soluciones de trabajo
• Muestra de sangre total anticoagulada
• Tubos de centrífuga
• Espectrofotómetro
• Centrífuga

- PROCEDIMIENTO

1. A partir de la solución madre preparamos las siguientes soluciones de trabajo:

• Solución 1 (1 g/L de NaCl) : 1 mL sol. madre + 99 mL de agua bidestilada
• Solución 2 (3 g/L de NaCl) : 3 mL sol. madre + 97 mL de agua bidestilada
• Solución 3 (4 g/L de NaCl) : 4 mL sol. madre + 96 mL de agua bidestilada
• Solución 4 (5 g/L de NaCl) : 5 mL sol. madre + 95 mL de agua bidestilada
• Solución 5 (6 g/L de NaCl) : 6 mL sol. madre + 94 mL de agua bidestilada
• Solución 6 (8 g/L de NaCl) : 8 mL sol. madre + 92 mL de agua bidestilada
• Solución 7 (10 g/L de NaCl) : 10 mL sol. madre + 90 mL de agua bidestilada

2. Colocamos 5 mL de cada solución en una batería de tubos de centrífuga 

3. Añadimos 25 microlitros de sangre total, agitamos y dejamos a temperatura ambiente durante 45-60 minutos.

4. A continuación centrifugamos a 3000 rpm durante 10 minutos y separamos el sobrenadante.

5. Medimos el grado de hemólisis del sobrenadante en un espectofotómetro a una longitud de onda de 540 nm, considerando el tubo con 1 g/L de NaCl como el 100% de hemólisis y el de 10 g/L de NaCl como el blanco (0% de hemólisis).

6. Por último representamos en un papel milimetrado ( en excel) en abscisas los g/L de NaCl  , y en ordenadas el porcentaje de hemólisis de los diferentes tubos , por interpolación se determinan cuál es la concentración de NaCl necesaria para producir una hemólisis del 50 % (H50) , siendo ese valor equivalente a la FOE .

Los valores normales están comprendidos entre 3,6-4,2/L NaCl.

- RESULTADOS

Por interpolación se determina donde se produce el 50 % de hemólisis. En este caso se corresponde con una concentración de 5 g/L (valores normales se sitúan entre 3,6 – 4,2 g/L).