PRÁCTICA 11: ROE
RESISTENCIA OSMÓTICA ERITROCITARIA
- FUNDAMENTO
La resistencia osmótica eritrocitaria (ROE) o fragilidad osmótica eritrocitaria (FOE) es una técnica realizada para el estudio de las membranopatias eritrocitarias. Debido a su forma biconcava, los eritrocitos pueden aceptar, sin producir hemolisis, una entrada de agua capaz de aumentar su volumen hasta el 70%.
La resistencia osmótica eritrocitaria (ROE) o fragilidad osmótica eritrocitaria (FOE) es una técnica realizada para el estudio de las membranopatias eritrocitarias. Debido a su forma biconcava, los eritrocitos pueden aceptar, sin producir hemolisis, una entrada de agua capaz de aumentar su volumen hasta el 70%.
- SIGNIFICADO CLÍNICO
Cuando existe un defecto en la forma del eritrocito que disminuye la relación S/V, como ocurre en la esferocitosis hereditaria, este limite disminuye, y la hemolisis comienza en presencia de soluciones menos hipotonicas, aumentando la ROE.
Cuando existe un defecto en la forma del eritrocito que disminuye la relación S/V, como ocurre en la esferocitosis hereditaria, este limite disminuye, y la hemolisis comienza en presencia de soluciones menos hipotonicas, aumentando la ROE.
Dicha medida se expresa como aquella concentración de NaCL (en g/L) necesaria para producir el 50% de la hemólisis (H50).
- MATERIAL Y REACTIVOS
Solución madre de NaCl de 100 g/L en agua bidestilada
- Soluciones de trabajo
- Muestra de sangre total anticoagulada
- Tubos de centrífuga
- Espectrofotómetro
- Centrífuga
- PROCEDIMIENTO
- A partir de la solución madre preparamos las siguientes soluciones de trabajo:
- Solución 1 (1 g/L de NaCl) : 1 mL sol. madre + 99 mL de agua bidestilada
- Solución 2 (3 g/L de NaCl) : 3 mL sol. madre + 97 mL de agua bidestilada
- Solución 3 (4 g/L de NaCl) : 4 mL sol. madre + 96 mL de agua bidestilada
- Solución 4 (5 g/L de NaCl) : 5 mL sol. madre + 95 mL de agua bidestilada
- Solución 5 (6 g/L de NaCl) : 6 mL sol. madre + 94 mL de agua bidestilada
- Solución 6 (8 g/L de NaCl) : 8 mL sol. madre + 92 mL de agua bidestilada
- Solución 7 (10 g/L de NaCl) : 10 mL sol. madre + 90 mL de agua bidestilada
2. Colocamos 5 mL de cada solución en una batería de tubos de centrífuga
3. Añadimos 25 microlitros de sangre total, agitamos y dejamos a temperatura ambiente durante 45-60 minutos.
4. A continuación centrifugamos a 3000 rpm durante 10 minutos y separamos el sobrenadante.
5. Medimos el grado de hemólisis del sobrenadante en un espectofotómetro a una longitud de onda de 540 nm, considerando el tubo con 1 g/L de NaCl como el 100% de hemólisis y el de 10 g/L de NaCl como el blanco (0% de hemólisis).
6. Por último representamos en un papel milimetrado ( en excel) en abscisas los g/L de NaCl , y en ordenadas el porcentaje de hemólisis de los diferentes tubos , por interpolación se determinan cuál es la concentración de NaCl necesaria para producir una hemólisis del 50 % (H50) , siendo ese valor equivalente a la FOE .
Los valores normales están comprendidos entre 3,6-4,2/L NaCl.
- RESULTADOS
Por interpolación se determina donde se produce el 50 % de hemólisis. En este caso se corresponde con una concentración de 5 g/L (valores normales se sitúan entre 3,6 – 4,2 g/L).
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