PRÁCTICA: RECUENTO DE LEUCOCITOS

RECUENTO MANUAL DE LEUCOCITOS

- FUNDAMENTO

La técnica consiste en diluir sangre anticoagulada con EDTA, en líquido de Turck y el recuento de las células mediante hemocitómetro o cámara de recuento utilizando un microscopio óptico.

Para calcular el valor total de recuento tendremos en cuenta la dilución usada, el área contada y la altura de la cámara utilizada.

- MATERIAL

• Tubos eppendorf
• Pipetas de 20 microlitros
• Cámara de Neubauer
• Papel de filtro

- REACTIVOS

Líquido de Turck (2mL ácido acético glacial,que rompe los hematíes;  1mL de violeta de genciana, que tiñe el núcleo de los leucocitos al 1% y 100 mL de agua destilada).

- MUESTRA

Sangre anticoagulada o capilar

- APARATAJE

Microscopio óptico

- PROCEDIMIENTO

1. Preparamos un tubo eppendorf con 0,38 ml de líquido de Turck.

2. Pipeteamos 20 μL de sangre en el tubo eppendorf, lavando varias, Habremos efectuado una dilución 1/200.

 

3. Tapamos el tubo y mezclamos suavemente .

4. Montamos la cámara, llenándola por capilaridad (sobre unos 10 μL).

5. Dejamos reposar durante 5 minutos para que sedimenten los leucocitos.

6. Enfocamos con el objetivo de 10x y con el de 20x y observamos la distribución de las células. El conteo se realiza con el objetivo de 40x.

7. Contamos los leucocitos presentes en 16 cuadros, de los 4 cuadros grandes situados en las esquinas de la cámara.

8. Comenzaremos por el cuadrado superior izquierdo e iremos en zig-zag.
No contaremos partículas extrañas ni pequeñas burbujas.Contaremos solo los leucocitos que se sitúen sobre las líneas superior y derecha.

9. Calculamos la cifra de los leucocitos contados en los 4 cuadros y los expresamos en leucocitos por mm3, teniendo en cuenta la dilución usada y el volumen de los cuadros.

Observamos lo siguiente:

- RESULTADOS

Cuadrado 1:   29             Cuadrado 3: 28

Cuadrado 2:   30             Cuadrado 4: 27          Total: 114 leucocitos

Si llamamos “B” al número de leucocitos contados en los 4 cuadrados grandes, tendremos:

B x Nº cuadros contados contados x espesor x superficie = B x 4 x 0,1 mm x 1mm 2 =               B x 0,4 mm3.

Si hemos contado B leucocitos en 0,4mm3, tendremos “X” leucocitos en 1 mm3:                   X= B x 1/0,4

Por tanto, el nº total de leucocitos en 1 mm3 de sangre será:

B x 1/0,4 x 20 = B x 2,5 x 20 = B x 50

114 x 50 =  5700 leucocitos/ mm3. 


- INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

Los valores normales se situan entre 4500 y 11000 leucocitos / mm3.