PRÁCTICA 4: FIBRINÓGENO (24/01/18)

DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DEL FIBRINÓGENO (MÉTODO DE CLAUSS)

Resultado de imagen de FIBRINOGENO



- INTRODUCCIÓN

El fibrinógeno es una proteína soluble del plasma sanguíneo precursor de la fibrina, su longitud es de 46 nm, su peso 340 kDa.
Es responsable de la formación de los coágulos de sangre. Cuando se produce una herida se desencadena la transformación del fibrinógeno en fibrina gracias a la actividad de la trombina.
Es una molécula fibrilar, que en sus extremos tiene cargas fuertemente negativas. Estos extremos permiten la solubilidad del compuesto y también repelen a otras moléculas del compuesto, previniendo la agregación.
Compuesto por tres pares de cadenas de polipéptidos que son, 2 cadenas Aα, 2 Bβ y 2γ (Aα,Bβ,γ)2 unidas por enlaces disulfuro, estas cadenas además están genéticamente ligadas y reguladas en forma coordinada en el ser humano.
Estas cadenas son sintetizadas en el hígado.

- FUNDAMENTO 

El fibrinógeno, en presencia de un exceso de trombina, se transforma en fibrina.
El tiempo de formación del coagulo es inversamente proporcional a la concentración de Fibrinógeno presente en la muestra de plasma. La determinación de fibrinógeno por el tiempo de coagulación de trombina, está basada en el método descrito por Clauss. En presencia de altas concentraciones de trombina, el tiempo necesario para la formación del coágulo en el plasma diluido es inversamente proporcional a la concentración de fibrinógeno.

- SIGNIFICADO CLÍNICO

Su determinación nos ayuda a evaluar las alteraciones en los mecanismo de coagulación.
La concentración de fibrinógeno se incrementa en inflamaciones agudas y embarazo; por el contrario, se observan valores bajos en terapias trombolíticas.


- MATERIAL

  • Tubos de ensayo
  • Cubetas de coagulómetro
  • Pipeta automática
  • Puntas de pipeta
  • Imanes
  • Gradilla




- REACTIVOS

  • R1(trombina bovina)
  • R2(tampón imidazol)
  • R3(solución caolín)
  • Calibrador
  • Control normal
  • Control patológico




- MUESTRA

Plasma obtenido por punción venosa diluido 1/10 en solución de citrato trisódico 3.8%

- PROCEDIMIENTO

1. Reconstruimos R1 en 2 ml de agua destilada, tapamos y mezclamos

2.Preparamos una dilución 1/10 de la siguiente forma : 50 µL de muestra + 450 µL de tampón Imidazol.



3. Preparamos las siguientes diluciones:



4. Cogemos 200 microlitros de cada dilución, y lo introducimos en otro tubo añadiendo 20 microlitros de R3

5. Atemperamos a 37ºC durante 4-6 minutos


6. A continuación, lo introducimos en el coagulómetro, (añadiendo previamente los imanes en las cubetas de coagulación) y añadimos 100 microlitros de R1






















7. Cronometramos la formación del coágulo
- RESULTADOS

  • Muestra: 40, 2


  • Diluciones:

DILUCIÓN
1/40
1/30
1/20
1/10
1/5
CONCENTRACIÓN (mg/dl)
108,2
96,5
70,3
32,9
20,6


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