PRÁCTICA 7: HEMOGLOBINA (12/02/18)

MÉTODO MANUAL DE RECUENTO DE HEMOGLOBINA


- INTRODUCCIÓN

La hemoglobina es una proteína que contiene hierro, otorga el color rojo a la sangre. Se encuentra en los glóbulos rojos y es la encargada del transporte de oxigeno por la sangre desde los pulmones a los tejidos.

- FUNDAMENTO

Esta práctica consiste en la oxidación de la hemoglobina por la acción del ferrocianuro a metahemoglobina y mediante el cianuro se convierte en cianmetahemoglobina, por lo tanto la intensidad del color formado es proporcional a la concentración de hemoglobina presente en la muestra ensayada.

- SIGNIFICADO CLÍNICO

Cuando el nivel de hemoglobina aparece por debajo de los niveles normales, indica anemia que puede obedecer a diferentes causas: anemia primaria, cáncer, embarazo, enfermedades renales o hemorragias. Si el nivel de hemoglobina es alto puede deberse a cardiopatÍas, deshidratación o estancia en lugares de gran altitud.


Imagen relacionadaResultado de imagen de deshidratacion


- MATERIAL

  • Gradillas
  • Cubetas de espectrofotometría
  • Tubos de ensayo
  • Micropipetas y puntas de pipeta

- REACTIVOS 

Captura.JPG
Casptura.JPG


IMG_20170117_090615.jpg  IMG_20170117_085132.jpg


- APARATAJE
  • Espectrofotómetro
  • Baño termostático

- PROCEDIMIENTO

 1. En primer lugar, prepararemos el reactivo de trabajo mezclando 245 ml de agua destilada con 5 ml de Reactivo de Drabkin (hemoglobin 50x)

 2. A continuación, introducimos lo siguiente en 3 tubos de ensayo:

Blanco
Patrón
Muestra
RT (ml)
5
5
5
Calibrador ((µl)

20

Muestra (µl)


20

3. Incubamos a temperatura ambiente durante 3 minutos y pasado este tiempo vertimos el contenido en las cubetas de espectrofotometría.


4. Medimos a 540 nm y leemos la absorbancia del calibrador y de la muestra frente al blanco de reactivo.

 - RESULTADOS
  • Absorbancia patrón: 0,385
  • Absorbancia muestra: 0,360
(A.muestra /A.patrón ) x 15  = g/dL de hemoglobina en la muestra.

Por lo tanto: (0,385/ 0,360) x 15 = 16,04 g/dl
- INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
Los valores de referencia en hombres son de 14-18 g/dL, mientras que en las mujeres es de 12-16 g/dL.
Como esta muestra sanguínea es de una mujer, los valores de hemoglobina están un poco por encima de la normalidad (la elevación es apenas imperceptible).

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