PRÁCTICA: RECUENTO DE HEMATÍES
RECUENTO MANUAL DE HEMATÍES
- FUNDAMENTO
Se basa en la dilución de la sangre total capilar o anticoagulada con EDTA, en líquido de Hayem, con una pipeta de dilución y recuento de las células mediante hemocitómetro o cámara de recuento utilizando un microscopio óptico. Para calcular el valor total de recuento tendremos en cuenta la dilución utilizada, el área contada y la altura de la cámara utilizada.
El líquido de Hayem contiene cloruro sódico para que sean isotónicos y evitar hemólisis, e incorpora citrato sódico como anticoagulante y un antiséptico como formalina.
- MATERIAL
- Pipetas de 20 microlitros
- Cámara de Neubauer
- Papel de filtro
- REACTIVOS
- Líquido diluyente Hayem
- APARATAJE
Microscopio óptico
- MUESTRA
Sangre anticoagulada o capilar
- PROCEDIMIENTO
1. Preparar un tubo con 3,98 ml de líquido de Hayem.
2. Pipetear 20 microlitros de sangre en el interior del tubo con líquido de Hayem, pipeteando y absorbiendo varias veces. La sangre se habrá diluido 200 veces (factor dilución = 1/200).
3. Tapar el tubo y mezclar suavemente por inversión.
4. Montar la cámara.
5. Llenar la cámara por capilaridad (se llena sobre unos 10 microlitros).
6. Dejar reposar la cámara durante 3 minutos en cámara húmeda para que sedimenten los hematíes. Nosotros utilizaremos una una placa de Petri con papel de filtro empapado en agua.
7. Enfocar con el objetivo de 10x y con el de 20x observar la distribución de las células. Realizaremos el conteo con el aumento de 40x.
8. Contaremos 5 cuadro, de los 25 situados en el medio de la cámara que se divide cada uno en 16 cuadros. Contaremos los 4 de las esquinas y el central, en forma de zig-zag.
9. Contaremos solo los hematíes situados sobre las líneas superior y derecha.
10. Calcularemos la cifra de hematíes de la muestra, teniendo en cuenta la dilución realizada y el volumen de los cuadros contados.
- RESULTADOS
Cuadrado 1: 75 Cuadrado 4: 89
Cuadrado 2: 81 Cuadrado 5: 90
Cuadrado 3: 70 Total: 405 hematíes
Para realizar los cálculos finales hay que tener en cuenta que cada cuadrado secundario tiene un área de 0,04 mm2 y en él se depositan las células contenidas en 0,004 mm3. Como se cuentan cinco cuadrados secundarios, el volumen total contado será de 0,02 mm3.
Teniendo en cuenta estos datos y la dilución utilizada (1/200), el recuento se calcula de la siguiente manera:
RBC = 405 x 10000 = 4,05 x 10^6 hematíes/ μL (mm3). (10000 = 10 microlitros x 5 cuadrados x 200 de la dilución).
- INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
Los valores normales están comprendidos entre 4,5 x 10^6 y 6 x 10^6 hematíes/ mm3, por lo que es un recuento bajo. Esto puede ser debido a algún error cometido a la hora de realizar la práctica.
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