PRÁCTICA: RECUENTO DE LEUCOCITOS
RECUENTO MANUAL DE LEUCOCITOS
- FUNDAMENTO
La técnica consiste en diluir sangre anticoagulada con EDTA, en líquido de Turck y el recuento de las células mediante hemocitómetro o cámara de recuento utilizando un microscopio óptico.
Para calcular el valor total de recuento tendremos en cuenta la dilución usada, el área contada y la altura de la cámara utilizada.
- MATERIAL
- Tubos eppendorf
- Pipetas de 20 microlitros
- Cámara de Neubauer
- Papel de filtro
- REACTIVOS
Líquido de Turck (2mL ácido acético glacial,que rompe los hematíes; 1mL de violeta de genciana, que tiñe el núcleo de los leucocitos al 1% y 100 mL de agua destilada).
- MUESTRA
Sangre anticoagulada o capilar
- APARATAJE
Microscopio óptico
- PROCEDIMIENTO
Microscopio óptico
- PROCEDIMIENTO
1. Preparamos un tubo eppendorf con 0,38 ml de líquido de Turck.
2. Pipeteamos 20 μL de sangre en el tubo eppendorf, lavando varias, Habremos efectuado una dilución 1/200.
3. Tapamos el tubo y mezclamos suavemente .
4. Montamos la cámara, llenándola por capilaridad (sobre unos 10 μL).
5. Dejamos reposar durante 5 minutos para que sedimenten los leucocitos.
6. Enfocamos con el objetivo de 10x y con el de 20x y observamos la distribución de las células. El conteo se realiza con el objetivo de 40x.
7. Contamos los leucocitos presentes en 16 cuadros, de los 4 cuadros grandes situados en las esquinas de la cámara.
8. Comenzaremos por el cuadrado superior izquierdo e iremos en zig-zag.
No contaremos partículas extrañas ni pequeñas burbujas.Contaremos solo los leucocitos que se sitúen sobre las líneas superior y derecha.
No contaremos partículas extrañas ni pequeñas burbujas.Contaremos solo los leucocitos que se sitúen sobre las líneas superior y derecha.
9. Calculamos la cifra de los leucocitos contados en los 4 cuadros y los expresamos en leucocitos por mm3, teniendo en cuenta la dilución usada y el volumen de los cuadros.
Observamos lo siguiente:
- RESULTADOS
Cuadrado 1: 29 Cuadrado 3: 28
Cuadrado 2: 30 Cuadrado 4: 27 Total: 114 leucocitos
Si llamamos “B” al número de leucocitos contados en los 4 cuadrados grandes, tendremos:
B x Nº cuadros contados contados x espesor x superficie = B x 4 x 0,1 mm x 1mm 2 = B x 0,4 mm3.
Si hemos contado B leucocitos en 0,4mm3, tendremos “X” leucocitos en 1 mm3: X= B x 1/0,4
Por tanto, el nº total de leucocitos en 1 mm3 de sangre será:
B x 1/0,4 x 20 = B x 2,5 x 20 = B x 50
114 x 50 = 5700 leucocitos/ mm3.
- INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
Los valores normales se situan entre 4500 y 11000 leucocitos / mm3.
- INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
Los valores normales se situan entre 4500 y 11000 leucocitos / mm3.
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